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HPLCカラム

カプセルパックNH2取扱説明書

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カプセルパックNH2取扱説明書

このたびは、ポリマーコート型高性能充填カラムCAPCELL PAKをお買い求めいただきありがとうございます。

CAPCELL PAK NH2は、多孔質球状シリカを単一層のシリコーンポリマー薄膜でコーティングし、さらにアミノ基を結合させた充填剤を充填したカラムです。本カラムは、アミノ基による弱アニオン交換モードとヒリックモードの機能をもつカラムです。 CAPCELL PAK NH2を長期間、安定してご使用いただくため、この取扱説明書をご熟読の上、正しくご使用いただきますようお願いいたします。

1.カラムの取扱い

  1. カラムに強いショックを与えると劣化の原因となりますので、丁寧に取り扱ってください。
  2. カラムの取りつけ取りはずしは、圧力計の指示がゼロの状態で行ってください。
  3. カラムの最大使用圧は20MPaです。

2.カラムの取りつけ

カラムのジョイントは外径1/16インチのチューブ用のメールナットタイプになっています。

  1. SUS仕様の場合には、装置の配管ジョイントが正しくあっていることおよびフェラルの先のパイプがジョイントの奥まで入っていることを確かめてください(図-1参照)。
    また、PEEK仕様の場合においても装置の配管ジョイントが正しく合っていること、および配管の先端がジョイントの奥まで入っていることを確かめてください。
  2. カラムを取付ける前に、装置配管内の液を使用する移動相に置換してください。
    ※カラム出荷時溶媒(カラムに同梱のカラムレポートに記載)をご確認の上,塩析などにご注意ください。
  3. カラムは、カラムラベルの矢印の方向に従って取付けてください。

3.分析

3-1.移動相について

  1. 使用できる溶媒の種類は、一般のシリカ系化学結合型カラムで使用される溶媒と同じです。
  2. CAPCELL PAK NH2の使用できるpH範囲は2~8です。カラムの早期劣化を防ぐため、移動相のpHはこの範囲を超えないようにご注意ください。
  3. 移動相は十分に脱気したのちメンブランフィルター(0.45µm以下)を通して、ゴミ等を除去してください。カラムインレットフィルターは2µmを使用しています。なお、異物によるカラムインレットフィルターの詰まりを防ぐため、ラインフィルターを使用されることをおすすめします。
  4. 新品カラムは、カラムレポートに示す移動相が封入されています。無機塩を含む移動相へ置換する場合は、析出しないように置換手順にご注意ください。
  5. 一般的に次のような使用方法はカラムを劣化させることになりますので避けてください。
    • 移動相の組成の頻繁な変更と相溶性の悪い移動相へのダイレクトな変更
    • カラム入口圧の急激な変化
    • 粘度の高い移動相の使用による高いカラム圧
    • 長時間にわたる水の通液
  6. 弱アニオン交換モードでは、一般的に次のような点を検討することで溶出挙動が大きく変わります。
    • pH(試料のイオン解離を十分に行うためにpHは試料のpKaより2.0以上離すことが理想的です。)
    • 塩濃度
    • 有機溶媒量
    • 塩の種類
  7. ヒリックモードでは、有機溶媒としてアセトニトリルのご使用をおすすめします。アセトニトリルの量を増加させると、保持力は大きくなります。

3-2.試料溶液の調製について

  1. 試料はできるだけ移動相と同一組成の溶媒に溶かしてください。
  2. 溶出力の強い試料溶媒を使用すると、分離能が低下したりカラム頭部で試料が析出したりしますのでご注意ください。
  3. 試料溶液中に不溶物が残っている場合は、フィルター(0.45µm以下)でろ過してください。

3-3.分析上の注意点

CAPCELL PAK NH2の分離は、主としてアミノ基による弱アニオン交換モードとヒリックモードにより行われます。従来のアミノカラムでは分離できない、あるいは分離不十分な試料は、まず、従来と同一の移動相で確認後、3-1.6.、7.をお試しください。

(1)イオン性物質の分析

  1. アセトニトリル/リン酸緩衝液混液でpHを一定にした移動相条件を設定してください。
  2. 移動相条件を検討する場合は高いpHから低いpHへ順次検討してください。
  3. カラムの平衡化に長時間(24時間以上)要することがあります。平衡化到達時間は、通液量と塩濃度に依存しますので、お急ぎの時は高流速にするか、同じpHで塩濃度を高くした緩衝液を通液してください。
  4. アスコルビン酸は、ピークがテーリングすることがあります。

(2)糖類の分析

  1. アセトニトリル/水混液での移動相条件を設定してください。アセトニトリル濃度が高いほど糖の保持が大きくなります。
  2. メタノールや緩衝液を含む移動相を用いるとピークがブロードになります。
  3. 他社シリカ系NH2カラムでの移動相条件のアセトニトリル含量を5vol%増やすことによりほぼ同等のクロマトグラムが再現できます。
  4. サンプルとして糖水溶液を注入するとピークがブロードになります。糖サンプルはアセトニトリルを50vol%以上含む溶媒となるよう調製してください。
  5. 酸性条件下での使用履歴のあるカラムでは糖類の保持時間・ピーク形状が変化します。

(3)アラントインの分析

アラントインは、pH2~8の範囲ではイオン化しませんが、移動相にリン酸緩衝液を用い、ヒリックモードで分析することが可能です。
移動相例:25mmol/L KH2PO4 / CH3CN = 20 / 80, pH2 (H3PO4)

4.カラムの保存

  1. 付属のプラグで密栓し、温度変化の小さい冷所に保存してください。
  2. 1ヵ月以内の保存であれば、使用した移動相と同一組成の有機溶媒と水の混液(酸、無機塩を含まない)で置換してください(水のみでの置換は避けてください。)。
  3. 1ヵ月以上の長期保存の場合は、2.の処理を行った後、出荷時溶媒で置換して保存してください(カラムレポート参照)。

5.カラム接続について

配管方法は図-1に従って行ってください。配管が不適切な場合、特に異種カラムに使用したチューブ(SUS仕様)をそのまま使用される時は、フェラルより先の長さ(図-1のV)がエンドフィッティングの長さ(図-1のL)と異なることが多く、トラブルの原因となります。 L>Vの場合、デッドボリュームを生じ、ピークのブロードニング、テーリングが起こったり、分離が悪くなったりすることがあります。

L<Vの場合、フェラルが密着しないため、液モレを生じます。 したがってカラムの交換と同時にフェラルを交換されることをおすすめします。

※頻繁にカラムの交換を行ったメールナットは、フェラルがつぶれて液モレを生じることがあります。このような場合に強くしめすぎると、ナットの頭部が切れる恐れがありますので早めにフェラルを交換してください。

PEEK仕様の配管をご使用される場合は、配管の先端がジョイントの奥まで入っていることを確かめてください。

図-1.カラムの接続

図-1.カラムの接続

6.エンドフィッティングについて

  1. 内径3.0~8mmの分析用カラムは、フィルター埋め込み式のエンドフィッティングを使用しています。フィルターのみの交換はできません。

7.トラブルと対策について

高速液体クロマトグラフによる測定時のトラブルにはさまざまな原因があり、そのすべてを列挙することは不可能ですので、ここではカラム及びその周辺で比較的起こりやすいものを示します。

トラブルの現象 原因 対策
1.カラム圧の上昇 異物のつまり
1.溶媒、試料溶液中のゴミ、不溶物
2.配管内の水あか
3.プランジャーシールの破片
4.サンプル成分の析出
・溶媒、試料溶液を予めメンブレンフィルターでろ過する
・ラインフィルターを装着する
・配管の清掃とプランジャーシールを交換する
・移動相でサンプル溶液を調製する
2.ピーク割れ、テーリング、ブロードニング 1.配管ミスによるデッドボリュームの発生
2.移動相条件が不適切
3.カラムの劣化
※カラムの劣化や充填層にボイドが発生した場合、修復は不可能です。
・配管を一度外し再度接続する
・pH、塩濃度、サンプル量等の検討
・検定用の標準溶液でカラム性能を確認する
※酸性条件での使用履歴があるNH2カラムでは糖の保持時間・ピーク形状が変化します。
3.保持時間が遅くなった、あるいは安定しない 1.液モレ(ポンプの圧力メーターの動きで判断できます)
2.移動相条件が不適切
3.カラムの安定化時間の不足
・ポンプ、配管系の液モレを調べる
・3-1参照
・十分な安定化時間をとる
4.保持時間が早くなった 1.強酸やアルカリの使用による結合基の切断(劣化)
2.移動相条件が不適切
3.カラムの安定化時間の不足

・3-1参照
・十分な安定化時間をとる

CAPCELL PAK NH2は厳密な性能チェックの後出荷していますが、万一不良がありました場合は、お手数ですが弊社もしくは販売代理店までご連絡ください。お取替えします。
ただし、カラムの寿命に関する事項や前記取扱注意事項に従わずご使用された場合は、保証の責を負いかねますのでご了承願います。
商品は、お受け取り後10日以上経過した場合、良品受領とさせていただきます。それ以降のお取替えはできかねますので、ご了承ください。

2011年4月21日
更新 2011年5月30日

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